貨號：Q15131

存儲條件：2~30℃ 20%乙醇中保存(4℃有利于長期保存)

產(chǎn)品簡介：

離子交換層析 (IEX) 是目前在生物分子分離純化中應(yīng)用最為廣泛的方法之一，依賴于正負電荷間的相互作用，利用不同生物分子在特定條件下帶有電荷的性質(zhì)和多少的差異來進行分離。

Crysto Q離子交換介質(zhì)以季銨基為功能基團偶聯(lián)在超高剛性瓊脂糖微球上，比Q Chromrose 6FF耐壓性更強，載量更高。Crysto Q為中等粒徑設(shè)計，應(yīng)用于樣品的初步捕獲和中度純化。

應(yīng)用領(lǐng)域：重組蛋白、抗體、核酸、病毒及類病毒顆粒、多糖等生物分子的分離純化。

產(chǎn)品信息：

使用方法：

1. 填料裝柱

Crysto Q 系列離子交換層析介質(zhì)可以在實驗室被填裝到中壓層析柱中，以擴大產(chǎn)量。將填料填裝到層析柱中，根據(jù)樣品中蛋白含量和填料載量選擇合適的層析柱和柱高。

2. 填料準備

在裝柱前，填料要平衡到室溫，建議采用靜置沉淀法，確定膠懸液濃度，我們原包裝的填料以50%的濃度儲存在20%的 乙醇中。壓縮比在1.10~1.12。

通過真空抽濾，將填料中20%乙醇溶液更換為裝柱所需的溶液(例如水),重復(fù)以上步驟3次，最后用裝柱緩沖液重新懸浮填料，建議膠懸液濃度為50%~60%。

所需懸濁液體積(mL)=裝柱體積(mL) X 填料壓縮因子/膠懸濁液濃度

3. 層析柱準備

中壓層析柱和裝柱器在使用前，應(yīng)用裝柱液潤洗，檢查層析柱完好無損傷，確保所選篩網(wǎng)(篩板)的孔徑和所選填料的粒徑相匹配，確保底端部件和頂部適配器的管件連接牢固。

4. 析柱裝柱

1) 取清洗干凈的中壓層析柱，借助蛋白純化儀或注射器，用裝柱液通過下端接頭排空管線及篩板中的空氣， 也可用重力法排空篩板及管線中的空氣，在柱子底部保留25px 高左右的液體，擰緊下堵頭，調(diào)整柱子使其垂直于地面。

2) 再次混勻膠懸液，確保懸液均一，借助玻璃棒將膠懸液緩慢且一次性貼壁倒入柱管中，用裝柱液沖洗柱管并加滿。注 意不要帶入氣泡。

注：當裝柱體積大于柱體積的50%以上時建議借助配套裝柱器裝柱。

3) 使其自然沉降，膠面上有1~50px澄清液時，將適配器管線連接設(shè)備，低流速運行，排出適配器管線中的氣泡，打開底部管線堵頭，將適配器以45°角放入玻璃管中，順時針擰緊上端固定帽，調(diào)節(jié)適配器使其O型圈浸入澄清液中，之后順時針擰緊上端調(diào)節(jié)帽。請確保整個操作在一條直線上完成，注意不要引入氣泡。

4) 可以采用高流速或者恒壓法壓至膠面清晰穩(wěn)定。讀取刻度并記錄，關(guān)閉流速。

5) 如用裝柱器裝柱，拆除裝柱器，用快速鎖將調(diào)節(jié)桿緩慢下移至膠面位置，將上端調(diào)節(jié)帽順時針擰緊，繼續(xù)運行上述流速，如果膠面發(fā)生改變，可以重新調(diào)節(jié)適配器高度。

6) 稍微擰松上端調(diào)節(jié)帽，按壓縮比確定最終柱床高度，擰緊上端調(diào)節(jié)帽，采用先下后上的方式擰緊上下端堵頭，裝柱完畢。

5. 樣品純化

5.1緩沖液準備

具體的緩沖體系應(yīng)根據(jù)目標蛋白的穩(wěn)定性和等電點、離子交換介質(zhì)的種類進行篩選和優(yōu)化。

建議使用緩沖液：

平衡緩沖液：50 mM  Tris-Hcl,pH8.0

洗脫緩沖液：50 mM  Tris-Hcl+1M NaCl, pH8.0

5.2 樣品準備

樣品在上樣前建議離心或用0.45μm 濾膜過濾，減少雜質(zhì)，提高純化效率和防止堵塞柱子。

5.3 樣品純化

1) 平衡：用0.5~1 CV 洗脫緩沖液進行預(yù)平衡，再用5~10CV 的平衡緩沖液平衡層析柱，至流出液電導和pH 不變(與平衡液一致);

2) 進樣：樣品緩沖液應(yīng)盡可能與平衡液一致。

3) 淋洗：繼續(xù)用平衡緩沖液淋洗至基線；

4) 洗脫：可以根據(jù)實際情況采取提高鹽濃度或改變流動相 pH 的方法依次洗脫吸附于層析介質(zhì)上的樣品。

5) 再生：每次層析之后可用0.5M~2M NaCl清洗層析柱，除去強結(jié)合的蛋白；

6) 如需二次上樣，可用平衡緩沖液清洗3~5CV,  待 pH 和電導率與平衡緩沖液基本一致即可使用。

6. 在位清洗

介質(zhì)使用數(shù)次(具體次數(shù)與原料的種類和來源及實驗要求有關(guān))后，需要對介質(zhì)進行在位清洗；

1) 對于通過離子鍵強結(jié)合的蛋白，可用3CV 2MNaCl清洗，并用3CV以上的去離子水清洗；

2) 對沉淀蛋白、疏水性結(jié)合的蛋白，可用0.2M~0.5M NaOH 清洗(與層析介質(zhì)接觸時間1~2小時),并用5CV以上平衡液和3CV以上的去離子水清洗；

3) 對強疏水性結(jié)合的蛋白、脂蛋白和脂類物質(zhì)，可用5CV以上的50%乙醇或30%異丙醇清洗，并用5CV-10CV以上的去離子水清洗。