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產(chǎn)品中心

Product Center
快速內(nèi)切酶 BspHI
產(chǎn)品簡(jiǎn)介

LabFD快速內(nèi)切酶 BspHI 是一系列經(jīng)過(guò)基因工程重組的快速限制性內(nèi)切酶,適用于質(zhì)粒DNA、PCR產(chǎn)物或基因組DNA等的快速酶切。

產(chǎn)品型號(hào):F7512S
更新時(shí)間:2025-10-10
廠商性質(zhì):代理商
訪問(wèn)量:96
詳細(xì)介紹在線留言
品牌LABLEAD貨號(hào)F7512S
規(guī)格30 rxns供貨周期一周
應(yīng)用領(lǐng)域生物產(chǎn)業(yè)

產(chǎn)品貨號(hào):F7512S

儲(chǔ)存條件:-20℃

同裂酶:CciI, PagI注:同裂酶對(duì)于不同的甲基化修飾可能具有不同敏感性。)

產(chǎn)品組成

組分

規(guī)格

LabFDTM BspHI

30 ul

10×LabFDTM Buffer

1 ml

10×LabFDTM Color Buffer

1 ml

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

 LabFD快速內(nèi)切酶是一系列經(jīng)過(guò)基因工程重組的快速限制性內(nèi)切酶,適用于質(zhì)粒DNA、PCR產(chǎn)物或基因組DNA等的快速酶切。所有LabFD快速內(nèi)切酶在通用的LabFD或 LabFD Color Buffer 中都具有優(yōu)良的活性,能夠在5~15分鐘內(nèi)完成酶切。此外,LABLEAD去磷酸化、連接試劑在LabFD Buffer中均具有100%活性,支持一管化反應(yīng),提升“酶切-修飾-連接"的體驗(yàn)。LabFD Color Buffer 包括紅色和黃色示蹤染料,可將產(chǎn)物直接用于凝膠電泳。LabFD Color Buffer的紅色染料與2500 bp雙鏈DNA片段在1%瓊脂糖凝膠中遷移速率接近;黃色染料與10 bp雙鏈DNA片段在1%瓊脂糖凝膠中遷移速率接近。

建議反應(yīng)條件:LabFD buffer37℃溫育;參照“DNA 快速酶切流程"配制反應(yīng)體系。

失活條件:80℃溫育 20 min。

 

質(zhì)量控制

功能活性檢測(cè)

37℃下,在 20ul 反應(yīng)體系中,1ul LabFDTM BspHI能夠在 15min 內(nèi)wan全消化1ug λDNA

超長(zhǎng)時(shí)間溫育檢測(cè)

37℃在 20ul 反應(yīng)體系中,將1ul LabFDTM BspHI與1ug λDNA共同溫育 3h,未檢測(cè)到其他核酸酶污染或星號(hào)活性引起的底物非特異性降解,更長(zhǎng)時(shí)間酶切可能出現(xiàn)星號(hào)活性

酶切-連接-再酶切檢測(cè)

37℃下,使用 10倍酶量的 LabFDTM BspHI消化 DNA 底物,回收酶切產(chǎn)物,在 22℃下使用 T4 DNA Ligase (Fast) 可以將超過(guò)95%的酶切產(chǎn)物重新連接。將連接產(chǎn)物再次回收后,使用相同的內(nèi)切酶可以重新切開(kāi)月95%以上的連接產(chǎn)物。

 

 

使用方法

1.DNA 快速酶切流程

1在冰上按如下建議的加樣順序配制反應(yīng)體系: 


質(zhì)粒DNA

PCR產(chǎn)物

基因組DNA

ddH2O

15 ul

16 ul

30 ul

10×LabFD Buffer或10×LabFD Color Buffer

ul

3 ul

5 ul

底物 DNA

2ul(up to 1 ug

10 ul (~0.2 ug)

10 ul (5 ug)

LabFDTM BspHI

1 ul

1 ul

ul

Total

20 ul

30 ul

50 ul

注:本體系適用于經(jīng)過(guò)純化的PCR產(chǎn)物酶切。未純化的PCR產(chǎn)物具備一定的離子強(qiáng)度,10×LabFD Buffer 加入量可適當(dāng)減少至2 μl。但由于DNA聚合酶同時(shí)具有外切酶活性,會(huì)影響酶切產(chǎn)物,因此如下一步需進(jìn)行克隆等操作,建議酶切前對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行純化。

2輕柔吸打或輕彈管壁以混勻(切勿渦旋),然后瞬時(shí)離心以收集掛壁液滴;

337℃溫育15 min(質(zhì)粒),或15~30 min(PCR產(chǎn)物),或30~60 min(基因組DNA)

480℃溫育 20 min 即可使酶失活,終止反應(yīng)可選;

(5) 如果使用LabFDTM Color Buffer進(jìn)行酶切反應(yīng),得到的產(chǎn)物可以直接進(jìn)行上樣電泳。

2. 雙酶切或多酶切

1每種快速內(nèi)切酶的用量為1 μl,并根據(jù)需要適當(dāng)擴(kuò)大反應(yīng)體系;

2所有快速內(nèi)切酶的體積總和不得超過(guò)總反應(yīng)體系的1/10;

3如果所用的幾種快速內(nèi)切酶的最適反應(yīng)溫度不同,應(yīng)先以最適溫度低的酶開(kāi)始酶切,再添加最適溫度較高的酶,在其最適反應(yīng)溫度下進(jìn)行酶切反應(yīng)。

3. 適用于質(zhì)粒的擴(kuò)大反應(yīng)體系

DNA

1 ug

2 ug

3 ug

4 ug

5 ug

LabFDTM BspHI

1 ul

2 ul

3 ul

4 ul

5 ul

10×LabFD Buffer或10×LabFD Color Buffer

1 ul

2 ul

3 ul

4 ul

5 ul

Total

20 ul

20 ul

30 ul

40 ul

50 ul

注:如果總反應(yīng)體系大于20 μl,應(yīng)適當(dāng)增加溫育時(shí)間,盡量使用水浴、金屬浴或沙浴。

不同 DNA 中的酶切位點(diǎn)數(shù)量

λDNA

ΦX174

pBR322

pUC57

pUC18/19

SV40

M13mp18/19

Adeno2

8

3

4

3

3

2

1

3

甲基化修飾影響

Dam

Dcm

CpG

EcoKI

EcoBI

剪切受影響

無(wú)影響

無(wú)影響

無(wú)影響

剪切受影響

在不同反應(yīng)緩沖液中的活性


LabFD™ Buffer

Thermo Scientific

FastDigest Buffer

NEB

 CutSmart®Buffer

Takara

QuickCut™Buffer

活性

100%

100%

100%

100%

注:活性數(shù)據(jù)來(lái)自 LABLEAD 限制酶標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)體系下的檢測(cè)。


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